分光光度法檢測數據不穩定的原因？使用分光光度法會有哪些影響數值的因素？

分光光度法的基本定律是朗伯一比爾定律(Lambert-Beer law)，是描述物質對某一波長光吸收的強弱與吸光物質的濃度及其液層厚度間的關系。

公式意義：

比爾-朗伯定律數學表達式：A=lg(1/T)=Kbc

A為吸光度,T為透射比(透光度),是出射光強度(I)比入射光強度(I0).

K為摩爾吸收系數.它與吸收物質的性質及入射光的波長λ有關.

c為吸光物質的濃度，b為吸收層厚度.【b也常用L替換，含義一致】

物理意義：

當一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質時,其吸光度A與吸光物質的濃度c及吸收層厚度b成正比，而透光度T與c、b成反比。

偏離原因（實踐：檢測不準確、不穩定的原因）

在分光光度分析中，比爾定律是一個有限的定律，其成立條件是待測物為均一的稀溶液、氣體等，無溶質、溶劑及懸濁物引起的散射;入射光為單色平行光。導致偏離朗伯-比爾定律的原因很多，但基本上可分為物理和化學兩個方面。物理方面主要是入射光的單色性不純所造成的;化學方面主要是由于溶液本身化學變化造成的。

單色光不純引起的偏離

嚴格說來，朗伯-比爾定律只適用于單色光。但由于儀器分辨能力所限，入射光實際為一很窄波段的譜帶。由于分光光度計分光系統中的色散元件分光能力差，即在工作波長附近或多或少含有其他雜色光，雜散光(非吸收光)也會對比爾定律產生影響，這些雜色光將導致朗伯-比爾定律的偏離。

實際上，理論上的單色光是不存在的，我們所做的只能是讓入射光的光譜帶寬盡可能的小，要盡可能的靠近單色光。

溶液性質引起的偏離

樣品溶液濃度的影響

比爾定律是一個有限的定律，它只適用于濃度小于0.01mol/L的稀溶液。因為濃度高時，吸光粒子間的平均距離減小，受粒子間電荷分布相互作用的影響，他們的摩爾吸收系數發生改變，導致偏離比爾定律。因此，待測溶液的濃度應該控制在0.01mol/L以下。

溶質和溶劑的性質

例如，碘在四氯化碳溶液中呈紫色，在乙醇中呈棕色，在四氯化碳溶液中即使含有1%乙醇也會使碘溶液的吸收曲線形狀發生變化。這是由于溶質和溶劑的作用，生色團和助色團也發生相應的變化，使吸收光譜的波長向長波長方向移動或向短波長方向移動，即所謂的紅移和藍移。

介質不均勻性

實踐：檢測甲醛樣本的時候就要觀察所檢樣本中有沒有雜質，顏色有沒有不均勻，有沒有分層。

朗伯-比爾定律是適用于均勻、非散射的溶液的一般規律，如果被測試液不均勻，是膠體溶液、乳濁液或懸浮液，則入射光通過溶液后，除了一部分被試液吸收，還會有反射、散射使光損失，導致透光率減小，使透射比減小，使實際測量吸光度增大，使標準曲線偏離直線向吸光度軸彎曲，造成對朗伯-比爾定律的偏離。

溶質的變化

比爾定律在有化學因素影響時不成立。解離、締合、生成絡合物或溶劑化等會對比爾定律產生偏離。離解是偏離朗伯-比爾定律的主要化學因素。溶液濃度的改變，離解程度也會發生變化，吸光度與濃度的比例關系便發生變化，導致偏離朗伯-比爾定律。 

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